稀釋水的質量對 BOD5 測量的準確性具有重要意義。因此，稀釋水空白的5天耗氧量必須小于0.2 mg/L，小于0.1 mg/L是比較好的。接種稀釋水應在0.3～1.0mg/L之間。

保證稀釋水水質的關鍵是控制有機物含量比較低，抑制微生物繁殖的物質含量比較低。 因此，使用蒸餾水作為稀釋水比較好。 用離子交換樹脂制成的純水不適合作為稀釋水，因為去離子水往往含有從樹脂中分離出來的有機物。

如果用于制備蒸餾水的自來水中含有某些揮發性有機化合物，為了防止它們殘留在蒸餾水中，蒸餾前應進行去除有機化合物的預處理。 用金屬蒸餾器制成的蒸餾水應注意檢查其中金屬離子的含量。

如果使用的稀釋水因存在有機物而達不到要求，可加入適量曝氣池接種物，在室溫或20℃下保存一定時間予以消除。接種量以5天耗氧量0.1mg/L為原則。為防止藻類大量繁殖，必須在暗室中進行儲存。如果儲存后的稀釋水中有沉淀物，僅使用上清液過濾除去沉淀。

為保證稀釋水中的溶解氧接近飽和，必要時可用真空泵或噴水器吸入凈化空氣，或用微型空壓機注入凈化空氣， 氧氣瓶可用于注入純氧，然后充氧。將稀釋后的水置于20℃培養箱中一定時間，使溶解氧達到平衡。冬季放置在較低室溫的稀釋水可能含有過多的溶解氧，而在炎熱的夏季則相反。因此，當室溫與20℃相差較大時，必須在培養箱中放置一段時間，使其與培養環境的氧分壓保持平衡。

測定BOD5時如何確定稀釋倍數？

稀釋倍數過大或過小都可能導致5d耗氧量過小或過多，超過正常耗氧量范圍則實驗失敗。但是，由于BOD5的測量周期較長，一旦出現這種情況，就不能按原樣補充。因此，必須高度重視稀釋因子的確定。

雖然工業廢水成分復雜，但BOD5值與CODCr值之比通常在0.2~0.8之間。造紙、印染、化工等行業的廢水比例較低。一些含有顆粒有機物的廢水，如酒糟廢水等，在測定其BOD5時，會因培養瓶底部的顆粒物沉淀而無法參與生化反應，導致顯著下降。較低的比率。

稀釋倍數的確定原則是測定BOD5時5d耗氧量應大于2mg/L，剩余溶解氧應大于1mg/L。稀釋后第二天培養瓶中的DO為7～8.5mg/L。假設5d耗氧量為4mg/L，稀釋因子為CODCr值與0.05、0.1125、0.175 三個的乘積系數。

例如在250mL培養瓶中CODCr為200mg/L時測定BOD5時，三個稀釋因子為：①200×0.005=10倍，②200×0.1125=2< @2.5 次，③200×0.175=35 次。如果采用直接稀釋法，取水樣體積為：①250÷10=25mL，②250÷2<@2.5≈11mL，③250÷35≈7mL。

按照這個采樣培養，會有1到2個符合上述兩個原則的溶解氧測量結果。如果有兩個稀釋倍數滿足上述原則，計算結果時應取平均值。如果剩余溶解氧小于1mg/L甚至為零，則應增加稀釋倍數。如果培養過程中溶解氧消耗量小于2mg/L，可能是稀釋倍數過大；另一個可能是微生物菌種不合適，活性差，或者有毒物質濃度太大，此時稀釋倍數也可能很大。培養瓶反而消耗更多溶解氧的現象。

若稀釋水為接種稀釋水，由于空白水樣耗氧量0.3～1.0mg/L，稀釋系數分別為0.05、0.125 和 0.2。

如果已知水樣CODCr的具體數值或近似范圍，則根據上述稀釋系數更容易分析BOD5值。當水樣的 CODCr 范圍未知時，為了縮短分析時間，可在 CODCr 測定過程中進行估算。

具體方法是：先配制每升含0.4251g鄰苯二甲酸氫鉀的標準溶液（此溶液的CODCr值為500mg/L），然后分別稀釋至CODCr值為400mg/L和300mg . /L、200mg/L、100mg/L稀溶液。

吸取20.0mL CODCr值為100mg/L～500mg/L的標準溶液，按常規方法加入試劑，測定CODCr值。加熱煮沸回流30分鐘后，讓它冷卻至室溫并用蓋子儲存以制成標準的比色系列。在按常規方法測定水樣CODCr值的過程中，煮沸回流30分鐘后，對比預熱后標準CODCr值的色柱，估算水樣的CODCr值，然后在測試 BOD5 時確定稀釋系數。

對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業廢水，必要時應在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。煮沸回流30分鐘后，對比預熱后標準CODCr值的色柱，估算出水樣的CODCr值，再測定BOD5時的稀釋倍數。對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業廢水，必要時應在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。

煮沸回流30分鐘后，對比預熱后標準CODCr值的色柱，估算出水樣的CODCr值，再測定BOD5時的稀釋倍數。對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業廢水，必要時應在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。